En 2019 ese mismo invernadero ubicado en la provincia de Ragusa (Sicilia, Italia) había tenido un cultivo de tomate que se eliminó tras detectarse el ToBRFV (Tomato brown rugose fruit virus).
En el pasado mes de enero, aproximadamente el 85% de un cultivo de pimiento rojo (Capsicum annuum) de un invernadero ubicado en la provincia de Ragusa (Sicilia, Italia) mostró síntomas similares a los de un virus. Los síntomas consistieron en un ligero mosaico y decoloración de las hojas jóvenes, limpieza de las venas en las hojas jóvenes, enrojecimiento del tallo con fuerte necrosis localizada en la intersección de las ramas secundarias, necrosis parcial del ápice vegetativo y marmoleado, mosaico y distorsión de los frutos.
En ese mismo invernadero se había detectado ToBRFV (Tomato brown rugose fruit virus) en un cultivo de tomate el año pasado, tras lo cual se procedió al arranque de la plantación y a la desinfección de las instalaciones. Asimismo, se recogieron treinta plantas (15 enfermas y 15 asintomáticas) para su posterior análisis.
Hasta el momento, solo se han detectado positivos de ToBRFV en tomate. En Almería, a finales de febrero, había cinco nuevos casos en cultivos de tomate, en fase de erradicación.Ese mismo mes, Francia comunicaba la primera detección del virus, también en tomate. Mucho antes, en octubre, ya eran cinco los cultivos afectados en Holanda.
Análisis de muestras
Con el fin de determinar el agente causal de la enfermedad detectada en el cultivo de pimiento mencionado, las muestras se analizaron para detectar la presencia del virus del mosaico del pepino (CMV) y el virus del marchitamiento del tomate (TSWV) por RT-PCR (Panno et al., 2012), y para el ToBRFV por inmunocaptura (IC) RT-PCR en tiempo real (Panno et al., 2019b). Los resultados fueron negativos para CMV y TSWV en las 30 muestras, mientras que 18 muestras (15 enfermas y tres asintomáticas) dieron una señal positiva en IC-RT-PCR en tiempo real.
Para confirmar la presencia de ToBRFV, se realizó RT-PCR con primers específicos ToBRFV-F y ToBRFV-R (Alkowni et al., 2019). Se obtuvieron ampliaciones del tamaño esperado, 560 pb, para las 15 plantas enfermas, mientras que solo una planta asintomática dio resultados positivos. Se purificaron cuatro ampliaciones (tres plantas enfermas y una planta asintomática) utilizando el kit de limpieza de PCR UltraClean (Mo-Bio, EE. UU.) Y se secuenciaron directamente en ambas direcciones utilizando un analizador de secuencia de ADN ABI PRISM 3100 (Applied Biosystems, EE. UU.). Las secuencias obtenidas de las cuatro muestras tenían c. El 99% de identidad y una secuencia se depositaron en GenBank (número de acceso GenBank MT188668). El análisis BLAST mostró una identidad del 99,6% con un aislado siciliano de ToBRFV (ToB-SIC01 / 19; MN167466) (Panno et al., 2019b).
Para examinar el desarrollo de síntomas en el pimiento, los extractos de savia de cada una de las cuatro muestras positivas se inocularon mecánicamente en tres plantas de pimiento dulce. Las plantas se cultivaron en suelo esterilizado en un invernadero a prueba de insectos, con un fotoperíodo de luz de 14 horas y una temperatura del aire objetivo de 28/20 ° C día / noche. Los síntomas se registraron semanalmente. Todas las plantas inoculadas desarrollaron los síntomas descritos anteriormente, 45 días después de la inoculación. La presencia sistémica de ToBRFV se confirmó por RT-PCR.
Los cultivos de tomate y pimiento representan alrededor del 70% del mercado de vegetales frescos en Sicilia. En consecuencia, se están tomando medidas de erradicación en esta región para tratar de contener el brote de ToBRFV. Hasta donde sabemos, este es el primer informe del virus ToBRFV en pimiento en Italia y en Europa.
Fuentes: BSPP (Panno S, Caruso AG, Blanco G, Davino S, 2020), www.ndrs.org.uk
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